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Staining Buffer Set轉錄因子染色緩沖液集的操作方法

更新時間:2025-09-03點擊次數(shù):159

1. 準備工作液:

1)工作液D:取1份PF00011-A(Foxp3 / 轉錄因子固定/破膜濃縮液 4X)和3份PF00011-B(Foxp3 / 轉錄因子固定/破膜稀釋液 1X)進行混合,混勻后備用。

2)工作液F:取1份PF00011-C(流式細胞術破膜緩沖液 10X)和9份超純水混勻后,制備成流式細胞術破膜緩沖液(1X)備用。

2. 按照Proteintech的細胞表面流式細胞術的實驗步驟中說明進行細胞表面染色。(如不需要進行細胞表面染色,略過此步驟。)

3. (表面染色后,洗滌,棄上清)每1 x 10^6/cells的EP管中加入1 mL工作液D,緩慢吹打以確保細胞重懸。在室溫下避光孵育45分鐘。

4. 在室溫下以 400-600g 離心5分鐘,棄上清,向EP管中加入2 mL工作液F,緩慢吹打以確保細胞重懸,400-600g 離心5分鐘,棄上清。

5. 將細胞沉淀重懸于 100 uL 工作液F中,靜置10-15min。

6. 使用抗體推薦用量 如5 uL/Test(或使用工作液F對流式抗體進行預稀釋),避光孵育抗體-細胞混合物30-45min,用于檢測細胞內抗原。

7. 孵育完畢后,每管中加入2 mL工作液F。

8. 在室溫下以400-600g離心試管 5 分鐘,然后棄上清。

9. 每管中加入2 mL工作液F。

10. 在室溫下以400-600g離心試管 5 分鐘,然后棄上清。

11. 將細胞沉淀重懸于加入0.2 mL工作液F中。

12. 在流式細胞儀上采集樣品。


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